Desarrollo de un Dispositivo de Ensayo de Flujo Lateral Basado en Nanotriángulos de Oro y Aptámero-Horquilla para la Detección de CEA por Métodos ópticos
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| 出版年: | PQDT - Global (2024) |
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ProQuest Dissertations & Theses
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| 抄録: | El cáncer es una enfermedad mortal que, según la Organización Mundial de la Salud (OMS), se considera la segunda causa de muerte en el mundo. Se recomienda enfocarse en la detección temprana y el tratamiento para reducir la mortalidad por cáncer. Por lo tanto, es crucial explorar nuevas tecnologías basadas en marcadores tumorales que puedan implementarse en pruebas de detección temprana para el diagnóstico de la enfermedad. Uno de estos biomarcadores tumorales de proteínas es el antígeno carcinoembrionario (CEA), una glicoproteína cuya concentración es un signo bien establecido de cáncer colorrectal, entre otros, y de metástasis. Los métodos convencionales para la detección de CEA son los inmunoensayos.Los inmunoensayos, basados en el uso de anticuerpos, son fundamentales en ensayos clínicos no invasivos. Entre ellos, destaca el ensayo de flujo lateral (LFA), que utiliza una membrana de nitrocelulosa con anticuerpos específicos para el análisis de muestras. Aunque son económicos y eficaces, los inmunoensayos tienen limitaciones, como la sensibilidad de los anticuerpos a cambios de pH y temperatura. Los aptámeros, oligonucleótidos selectivos, al ser más estables y económicos, han surgido como alternativa para detectar antígenos, ofreciendo mayor versatilidad y menor costo. Entre ellos, por aptámeros horquilla destacan por su cambio conformacional al entrar en contacto con el antígeno, siendo una opción prometedora para el reconocimiento molecular.En este trabajo se desarrolló un nanoaptasensor basado en nanotriángulos de oro (AuNTs) con un λmax de 785 nm, los cuales fueron modificados con un aptámerohorquilla selectivo para CEA. Se estudió el pretratamiento del aptámero previo a la funcionalización, y se estabilizó el nanoaptasensor utilizando distintos agentes de relleno, como 2’-deoxiadenosin-5’-trifosfato disódico (dATP), el ácido 3-mercaptopropiónico (MPA) y cadenas de polietilenglicol tiolado con dos grupos funcionales diferentes (HS-PEG(7)-OMe y HS-PEG(8)-COOH).En los ensayos preliminares de detección de CEA en solución (0, 5 y 10 µg/mL), se evaluaron los nanoaptasensores preparados. Posteriormente, se llevó a cabo la optimización de las tiras de flujo lateral utilizando nanotriángulos con un λmaxde 1100 nm. Se consideraron parámetros como el pretratamiento de la almohadilla de conjugado, el medio del nanoaptasensor, el running buffery el tipo de nitrocelulosa.Después de la optimización, se evaluó el desempeño del nanoaptasensor basado en los AuNTs con una λmaxde 785 nm, modificados con el aptámero-horquilla y dATP, el cual mostró los mejores resultados en los ensayos preliminares en solución. La detección de CEA se probó con distintas concentraciones del biomarcador (0,18, 45, 90, 180 y 1800 ng/mL) mediante la técnica LFA. Además, se estudiaron los ensayos LFA mediante colorimetría y SERS. Los resultados indicaron que el nanoaptasensor permitió discernir concentraciones de CEA en el rango de 90 ng/mL mediante colorimetría, y concentraciones de hasta 4.5 ng/mL por SERS. Cancer is a deadly disease that, according to the World Health Organization (WHO), is considered the second cause of death in the world. It is recommended to focus on early detection and treatment to reduce cancer mortality. Therefore, it is crucial to explore new technologies based on tumor markers that can be implemented in early detection tests for the diagnosis of the disease. One of these protein tumor biomarkers is the carcino-ambriatic antigen (CEA), a glycoprotein whose concentration is a well -established sign of colorectal cancer, among others, and metastases. Conventional methods for CEA detection are immunoassays.Immunoassays, based on the use of antibodies, are fundamental in non -invasive clinical trials. Among them, the lateral flow test (LFA) stands out, which uses a nitrocellulose membrane with specific antibodies for sampling analysis. Although they are economical and effective, immunoassays have limitations, such as the sensitivity of antibodies to pH and temperature changes. The stables, selective oligonucleotides, being more stable and economical, have emerged as an alternative to detect antigens, offering greater versatility and lower cost. Among them, for a stopwill, they stand out for their conformational change when coming into contact with the antigen, being a promising option for molecular recognition.In this work, a nano -abstain -based nano -absence was developed in gold nanotriángles (Autnts) with a 785 nm λmax, which were modified with a selective skill for CEA. The pretreatment of the aptmero prior to functionalization was studied, and the nano-abstoring was stabilized using different filling agents, such as 2’-deoxyadenosin-5’-Disodious trifosphate (DATP), 3-mercaptopropionic acid (MPA) and polyethylene glycol telled with two different functional groups with two different functional groups (HS-PEG (7) -ome and HS-PEG (8) -COOH).In preliminary CEA detection tests in solution (0, 5 and 10 µg/ml), prepared nano -abstracts were evaluated. Subsequently, the optimization of lateral flow strips was carried out using nanotriángulos with a λmaxof 1100 nm. Parameters were considered such as the pretreatment of the conjugate pad, the middle of the nanoistsensor, therunning bufferand the type of nitrocellulose.After optimization, the performance of the nanoptary -based on the Auts with a λ was evaluatedmaxof 785 Nm, modified with the skill-orquilla and DATP, which showed the best results in preliminary tests in solution. The CEA detection was tested with different concentrations of the biomarker (0.18, 45, 90, 180 and 1800 ng/ml) through the LFA technique. In addition, LFA tests were studied through colorimetry and be. The results indicated that the nano -abstoring allowed to discern CEA concentrations in the range of 90 ng/ml through colorimetry, and concentrations of up to 4.5 ng/ml by SERS. |
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| ISBN: | 9798290600246 |
| ソース: | ProQuest Dissertations & Theses Global |